Optimal konsentrasiyanı necə təyin etmək olar?
İnduktor IPTG (izopropil-beta-d-tioqalaktozid) üçün konsentrasiya nə qədər yüksək olarsa, bir o qədər yaxşıdır.Optimal konsentrasiya xüsusi eksperimental şəraitdən və istənilən induksiya effektindən asılıdır.
Ümumiyyətlə, IPTG-nin konsentrasiyası 0,1-1 mM aralığında istifadə olunur.Aşağı konsentrasiyalar hüceyrə böyüməsinə mənfi təsirləri azalda bilər və hədəf zülalların həddindən artıq ifadəsi səbəbindən sitotoksikliyi azalda bilər.Daha yüksək konsentrasiyalar hüceyrə artımına və ifadə səmərəliliyinə təsir edərək həddindən artıq hüceyrə metabolik yükə səbəb ola bilər.
Optimal konsentrasiyanı təyin etməyin yolu müxtəlif konsentrasiyalarda IPTG induksiya testlərini aparmaqla hədəf zülalın ifadə səviyyəsini qiymətləndirmək ola bilər.Kiçik miqyaslı mədəniyyət testləri bir sıra IPTG konsentrasiyalarından (məsələn, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM və s.) istifadə etməklə həyata keçirilə bilər və müxtəlif konsentrasiyalarda ifadə effekti hədəf zülalın ifadə səviyyəsinin aşkarlanması ilə qiymətləndirilə bilər (məsələn, Qərbi ləkə və ya flüoresan aşkarlanması).Eksperimental nəticələrə əsasən, ən yaxşı ifadə effekti verən konsentrasiya optimal konsentrasiya kimi seçilmişdir.
Bundan əlavə, oxşar eksperimental şəraitdə ümumi istifadə edilən IPTG konsentrasiyası diapazonunu başa düşmək üçün müvafiq ədəbiyyata və ya digər laboratoriyaların təcrübəsinə müraciət edə və sonra eksperimental ehtiyaclara uyğun olaraq optimallaşdıra və tənzimləyə bilərsiniz.
Qeyd etmək vacibdir ki, optimal konsentrasiya müxtəlif ifadə sistemlərindən, hədəf zülallardan və eksperimental şəraitdən asılı olaraq dəyişə bilər, ona görə də hər bir halda optimallaşdırmaq daha yaxşıdır.
Göndərmə vaxtı: 28 sentyabr 2023-cü il