4-Nitrofenil beta-D-qalaktopiranosid CAS: 200422-18-0

Effekt: ONPG β-qalaktosidaza fermentinin varlığını və fəaliyyətini aşkar etmək üçün xüsusi olaraq istifadə edilən substratdır.β-qalaktosidaza fermenti mövcud olduqda və aktiv olduqda, ONPG-ni iki məhsula ayırır: o-nitrofenol və qalaktoza törəməsi.O-nitrofenolun sərbəst buraxılması spektrofotometrdən istifadə edərək ölçülə bilən sarı rəng dəyişikliyi ilə nəticələnir.

Tətbiq: ONPG molekulyar biologiya və biokimya tədqiqatlarında bir neçə tətbiqə malikdir:

β-qalaktosidaza aktivliyinin təyini: ONPG adətən β-qalaktosidaza fermentinin aktivliyini ölçmək və kəmiyyətini müəyyən etmək üçün istifadə olunur.Fermentin aktivliyi ilə düz mütənasib olan o-nitrofenolun əmələ gəlmə sürəti spektrofotometrik olaraq ölçülə bilər.

Gen ifadəsi və tənzimlənməsi: ONPG tez-tez gen ifadəsi və tənzimləmə tədqiqatları ilə əlaqəli təcrübələrdə istifadə olunur.Xüsusi promotorların nəzarəti altında genlərin ifadəsini öyrənmək üçün tez-tez istifadə olunan lacZ füzyon sistemi kimi füzyon protein analizlərində istifadə olunur.ONPG-dən istifadə edərək ölçülən beta-qalaktosidaz aktivliyi gen ifadəsi səviyyəsinə dair fikirlər verir.

β-qalaktosidaza aktivliyinin skrininqi: ONPG, β-qalaktosidazanı kodlayan LacZ geninin varlığını və funksionallığını müəyyən etmək üçün rekombinant DNT texnologiyasında kolorimetrik skrininq üsulu kimi istifadə edilə bilər.Bu skrininq metodu maraq doğuran geni ehtiva edən klonları müəyyən etməyə kömək edir.

Ferment kinetikasının öyrənilməsi: ONPG β-qalaktosidaza fermentinin kinetikasının öyrənilməsində də faydalıdır.Müxtəlif substrat konsentrasiyalarında ferment-substrat reaksiyasının sürətini ölçməklə, Michaelis-Menten sabitləri (Km) və maksimum reaksiya sürətləri (Vmax) kimi kinetik parametrləri müəyyən etmək mümkündür.