4-Nitrofenil beta-D-qalaktopiranozid CAS:200422-18-0

Təsir: ONPG, β-qalaktozidaza fermentinin mövcudluğunu və aktivliyini aşkar etmək üçün xüsusi olaraq istifadə edilən substratdır. β-qalaktozidaza fermenti mövcud olduqda və aktiv olduqda, ONPG-ni iki məhsula parçalayır: o-nitrofenol və qalaktoza törəməsi. O-nitrofenolun sərbəst buraxılması spektrofotometr istifadə edilərək ölçülə bilən sarı rəng dəyişikliyinə səbəb olur.

Tətbiq: ONPG molekulyar biologiya və biokimya tədqiqatlarında bir neçə tətbiqə malikdir:

β-qalaktozidaza aktivliyinin təyini: ONPG, β-qalaktozidaza fermentinin aktivliyini ölçmək və kəmiyyətləndirmək üçün adətən istifadə olunur. Ferment aktivliyi ilə birbaşa mütənasib olan o-nitrofenol əmələ gəlmə sürəti spektrofotometriya ilə ölçülə bilər.

Gen ifadəsi və tənzimlənməsi: ONPG tez-tez gen ifadəsi və tənzimlənməsi tədqiqatları ilə əlaqəli təcrübələrdə istifadə olunur. Xüsusi promotorların nəzarəti altında genlərin ifadəsini öyrənmək üçün tez-tez istifadə olunan lacZ birləşmə sistemi kimi birləşmə protein analizlərində istifadə olunur. ONPG istifadə edilərək ölçülən beta-qalaktozidaza aktivliyi gen ifadəsi səviyyəsi haqqında məlumat verir.

β-qalaktozidaza aktivliyinin skrininqi: ONPG, β-qalaktozidazanı kodlayan LacZ geninin mövcudluğunu və funksionallığını müəyyən etmək üçün rekombinant DNT texnologiyasında kolorimetrik skrininq metodu kimi istifadə edilə bilər. Bu skrininq metodu, maraq doğuran gen ehtiva edən klonların müəyyən edilməsinə kömək edir.

Ferment kinetikası tədqiqatları: ONPG həmçinin β-qalaktozidaza fermentinin kinetikasını öyrənməkdə də faydalıdır. Müxtəlif substrat konsentrasiyalarında ferment-substrat reaksiyasının sürətini ölçməklə, Michaelis-Menten sabitləri (Km) və maksimum reaksiya sürətləri (Vmax) kimi kinetik parametrləri təyin etmək mümkündür.