Ditiotreitol (DTT), yeni yaşıl qatqı kimi də tanınan, geniş istifadə edilən reduksiyaedici maddədir. İki merkaptan qrupuna (-SH) malik kiçik molekulyar üzvi birləşmədir. Reduksiyaedici xüsusiyyətləri və stabilliyinə görə DTT biokimya və molekulyar biologiya təcrübələrində geniş istifadə olunur.
DTT-nin əsas rolu zülallarda və digər biomolekullarda disulfid rabitələrini azaltmaqdır. Disulfid rabitəsi zülalın qatlanması və sabitliyinin vacib hissəsidir, lakin reduksiya edilə bilən SDS-PAGE analizi, zülalın rekombinasiyası və qatlanması kimi müəyyən təcrübi şəraitdə zülalın fəza quruluşunu açmaq üçün disulfid rabitəsini iki tiol qrupuna qədər azaltmaq lazımdır. DTT disulfid rabitələri ilə reaksiyaya girərək onları merkaptan qruplarına qədər azalda bilər və beləliklə, zülalın fəza quruluşunu açır və təhlil etməyi və manipulyasiya etməyi asanlaşdırır.
DTT həmçinin ferment aktivliyini və sabitliyini qorumaq üçün də istifadə edilə bilər. Bəzi ferment katalizli reaksiyalarda fermentin aktivliyi oksidləşdirici tərəfindən azala bilər. DTT oksidləşdiricilərlə reaksiyaya girərək onları zərərsiz maddələrə çevirə və bununla da fermentin aktivliyini və sabitliyini qoruya bilər.
β-merkaptoetanol (β-ME) kimi ənənəvi reduksiyaedici maddələrlə müqayisədə DTT daha təhlükəsiz və daha sabit reduksiyaedici maddə hesab olunur. O, yalnız sulu məhlulda sabit deyil, həm də yüksək temperatur və turşu-qələvi şəraitində reduksiyaedici xüsusiyyətlərini qoruyub saxlayır.
DTT-nin istifadəsi nisbətən sadədir. Ümumiyyətlə, DTT müvafiq buferdə həll edilir və sonra eksperimental sistemə əlavə olunur. DTT-nin optimal konsentrasiyası spesifik təcrübəyə uyğun olaraq müəyyən edilməlidir və ümumiyyətlə 0,1-1 mM diapazonunda istifadə olunur. Daha aşağı konsentrasiyalar hüceyrə böyüməsinə mənfi təsirləri azalda bilər və hədəf zülalların həddindən artıq ifadə olunması səbəbindən sitotoksikliyi azalda bilər. Daha yüksək konsentrasiyalar həddindən artıq hüceyrə metabolik yükünə səbəb ola bilər ki, bu da hüceyrə böyüməsinə və ifadə səmərəliliyinə təsir göstərir.
Optimal konsentrasiyanı təyin etməyin yolu hədəf zülalın ifadə səviyyəsini müxtəlif konsentrasiyalarda IPTG induksiya testləri aparmaqla qiymətləndirmək ola bilər. Kiçik miqyaslı kultura testləri müxtəlif IPTG konsentrasiyaları (məsələn, 0,1 mM, 0,5 mM, 1 mM və s.) istifadə etməklə aparıla bilər və müxtəlif konsentrasiyalarda ifadə effekti hədəf zülalın ifadə səviyyəsini aşkar etməklə (məsələn, Vestern blot və ya flüoresans aşkarlanması) qiymətləndirilə bilər. Təcrübə nəticələrinə görə, ən yaxşı ifadə effektinə malik konsentrasiya optimal konsentrasiya kimi seçilmişdir.
Bundan əlavə, oxşar təcrübi şəraitdə tez-tez istifadə olunan IPTG konsentrasiya diapazonunu anlamaq və sonra təcrübi ehtiyaclara uyğun olaraq optimallaşdırmaq və tənzimləmək üçün müvafiq ədəbiyyata və ya digər laboratoriyaların təcrübəsinə də müraciət edə bilərsiniz.
Qeyd etmək vacibdir ki, optimal konsentrasiya müxtəlif ifadə sistemlərindən, hədəf zülallarından və təcrübi şəraitdən asılı olaraq dəyişə bilər, buna görə də hər bir hal üçün fərdi olaraq optimallaşdırmaq ən yaxşısıdır.
Xülasə, DTT, zülallarda və digər biomolekullarda disulfid bağlarını azaltmaq və ferment aktivliyini və sabitliyini qorumaq üçün istifadə edilə bilən geniş yayılmış bir reduksiyaedici maddədir. Biokimya və molekulyar biologiya təcrübələrində geniş istifadə edilmişdir.
Yazı vaxtı: 28 sentyabr 2023