Ətrafımızda adi görünən, əslində isə səssizcə bizə çoxlu töhfələr verən bir çox adsız qəhrəmanlar var.Proteinaz K molekulyar diaqnostika sənayesində "adsız qəhrəmandır", baxmayaraq ki, sənayedəki "böyük və güclü" ilə müqayisədə, proteinaz K o qədər zəifdir ki, biz onun əhəmiyyətini çoxdan nəzərdən qaçırmışıq.Yeni tac epidemiyasının başlaması ilə proteinaza K-yə tələbat artdı və yerli və xaricdəki tədarük istehlakdan çox geri qaldı və hər kəs birdən proteinaz K-nin çox vacib olduğunu başa düşdü.
Proteinaz K nə üçün istifadə olunur?
Proteinaz K proteolitik ferment aktivliyi olan serin proteazdır və geniş mühitlərdə (pH (4-12,5), yüksək duzlu tampon, 70°C yüksək temperatur və s.) fəaliyyətini saxlaya bilir.Bundan əlavə, K proteinazının fəaliyyəti SDS, sidik cövhəri, EDTA, guanidin hidroxlorid, guanidin izotiyosiyanat və s. tərəfindən maneə törədilmir və müəyyən miqdarda yuyucu vasitə də proteinaz K. fəaliyyətini gücləndirə bilər tibbi müalicə (virus və mikrob dezinfeksiyası) ), qida (ətin yumuşatılması), dəri (saçların yumşaldılması), şərabçılıq (spirtlərin aydınlaşdırılması), amin turşularının hazırlanması (parçalanmış lələklər), nuklein turşularının çıxarılması, in situ hibridləşdirilməsi və s., proteinaz K tətbiqləri var.Ən çox istifadə edilən tətbiq nuklein turşusunun çıxarılmasıdır.
Proteinaz K nümunədəki bütün növ zülalları, o cümlədən nuklein turşuları ilə sıx bağlı olan histonları fermentləşdirə bilər, beləliklə, nuklein turşuları nümunədən ayrılıb ekstrakta buraxıla bilər, bu da ekstraksiya və təmizlənmənin növbəti mərhələsini asanlaşdırır.Viral nuklein turşusunun aşkarlanmasında proteinaza K virus nümunəsi həllində vacib komponentlərdən biridir.Proteinaz K virusun örtük zülalını çatlaya və təsirsiz hala gətirə bilər ki, bu da daşınma və aşkarlama mərhələsində daha təhlükəsizdir;Bundan əlavə, proteinaz K həmçinin RNazı pisləşdirə bilər, viral RNT-nin deqradasiyasına mane olur və nuklein turşusunun aşkar edilməsini asanlaşdırır.
Proteinaz K-nin bir gecədə şöhrəti
İstər elmi tədqiqat sahəsində, istərsə də IVD sahəsində, nuklein turşusunun çıxarılması ən əsas təcrübədir, buna görə də proteinaz K həmişə çox vacib bir varlıq olmuşdur.Ancaq keçmişdə proteinaz K rolundan daha az tanınırdı.Bunun böyük bir hissəsi proteinaz K-nin tələb və təklif əlaqəsinin çox sabit olması idi.Proteinaz K tədarükünün problem olacağını az adam düşünər.
Yeni tac epidemiyasının başlaması ilə nuklein turşusu testinə tələbat artdı.2020-ci ilin iyun ayının sonlarına olan məlumata görə, Çin təxminən 90 milyon yeni tac testini tamamladı və bu rəqəm qlobal miqyasda daha həyəcanvericidir.Nuklein turşusunun çıxarılması təcrübələrində proteinaz K-nin iş konsentrasiyası təxminən 50-200 μg/ml təşkil edir.Ümumiyyətlə, nuklein turşusu nümunəsini çıxarmaq üçün təxminən 100 μg proteinaza K lazımdır.Faktiki istifadədə, nuklein turşusunun çıxarılmasının səmərəliliyini artırmaq üçün tez-tez Proteinase K artan miqdarda istifadə ediləcəkdir.Yeni koronavirusun nuklein turşusunun aşkarlanması böyük miqdarda proteinaza K tələbatını gətirdi.Proteinaz K-nin orijinal tələb və təklif balansı tez pozuldu və proteinaz K bir gecədə mühüm epidemiyanın qarşısının alınması materialına çevrildi.
Proteinaz K istehsalında çətinliklər
Epidemiyanın inkişafı ilə proteinaz K-nin vacib dəyəri insanlar tərəfindən qiymətləndirilsə də, proteinaz K-nin həddindən artıq aşağı olması səbəbindən bir neçə yerli şirkətlərin proteinaz K istehsalı ilə məşğul olması utancvericidir. İnsanlar proteinaz K istehsalını qurmaq istəyirik. İstehsal prosesi zamanı proteinaz K-nin son dərəcə xüsusi bir protein olduğu aşkar edilmişdir.Qısa müddət ərzində proteinaz K-nin istehsal gücünü genişləndirmək olduqca çətin məsələdir.
Proteinaz K-nin geniş miqyaslı istehsalı aşağıdakı çətinliklərlə üzləşir
1. Aşağı ifadə
Proteinaz K zülalların əksəriyyətini qeyri-spesifik olaraq parçalaya bilər və ekspressiv ana hüceyrə üçün ciddi toksikliyə səbəb ola bilər.Buna görə də, proteinaz K-nin ifadə səviyyəsi ümumiyyətlə çox aşağıdır.Proteinaz K-ni yüksək şəkildə ifadə edən ekspressiya sistemlərinin və ştammların skrininqi ümumiyyətlə daha uzun dövr tələb edir.
2. Piqmentlərin və nuklein turşularının qalıqları
Böyük miqyaslı fermentasiya böyük miqdarda piqment və ana nuklein turşusu qalıqlarını təqdim edir.Sadə bir təmizləmə prosesi ilə bu çirkləri aradan qaldırmaq çətindir və kompleks təmizləmə xərcləri artırır və bərpa sürətini azaldır.
3. Qeyri-sabitlik
Proteinaz K kifayət qədər stabil deyil, özünü fermentləşdirə bilir və onu qoruyucu vasitə olmadan 37°C-də uzun müddət stabil saxlamaq çətindir.
4. Asanlıqla çökdürür
Dondurulmuş qurudulmuş proteinaz K tozunu hazırlayarkən, dondurulmuş qurudulmuş tozda proteinaz K-nın bərk tərkibinin böyük olmasını təmin etmək üçün yüksək konsentrasiyada dondurulmuş qurudulmuş qoruyucu maddə əlavə etmək lazımdır, lakin proteinaz K konsentrasiyası 20 mq/mL və yuxarıya çatır, bu, asandır yığılma çöküntü əmələ gətirir və bu, yüksək bərk tərkibli proteinaz K-nın dondurularaq qurudulmasına böyük çətinliklər gətirir.
5. Böyük investisiyalar
Proteinaz K güclü proteaz aktivliyinə malikdir və laboratoriyada digər proteazları hidroliz edə bilir.Buna görə də, proteinaz K tədqiqat və təkmilləşdirmə və istehsal üçün xüsusi istehsal sahələri, avadanlıq və personal tələb edir.
XD BIOCHEM-in proteinaz K məhlulu
XD BIOCHEM yetkin zülal ifadəsi və təmizlənməsi platformasına malikdir və rekombinant zülalların ifadəsi və təmizlənməsi və istehsal proseslərinin optimallaşdırılması sahəsində zəngin təcrübəyə malikdir.Tədqiqat və təkmilləşdirmə qrupunun sürətli formalaşdırılması sayəsində proteinaz K-nin geniş miqyaslı istehsal prosesi aradan qaldırıldı.Dondurulmuş qurudulmuş tozun aylıq çıxışı 30 kq-dan çoxdur.Məhsul sabit performansa, yüksək ferment spesifik fəaliyyətə malikdir və sitoxrom və nuklein turşusu qalıqları yoxdur.XD BIOCHEM ilə əlaqə saxlamağa xoş gəlmisiniz Sınaq paketini əldə edin (E-poçt:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM-in texniki həlləri daxildir
Çox nüsxəli plazmid inteqrasiyasından istifadə edərək, 8 q/L ifadə səviyyəsinə malik yüksək ifadəli ştamlar seçilir ki, bu da proteinaz K-nin aşağı ifadə səviyyəsi problemini aradan qaldırır.
Çox mərhələli təmizləmə prosesinin qurulması vasitəsilə proteinaz K-nin ev sahibi sitoxrom və nuklein turşusu qalıqları standart dəyərdən aşağı uğurla çıxarıldı.
Qoruyucu bufer formulalarının yüksək məhsuldarlıqlı skrininqi vasitəsilə proteinaz K-ni 37°C-də sabit saxlaya bilən bufer seçilmişdir.
Skrininq tamponları proteinaz K-nin asanlıqla yığılması və yüksək konsentrasiyalarda çökməsi problemini aradan qaldırır və proteinaz K-nın yüksək bərk tərkibli dondurularaq qurudulması üçün əsas qoyur.
XD BIOCHEM proteinaz K nümunəsi
XD BIOCHEM proteinaz K sabitlik testi: otaq temperaturunda 80 gündən sonra aktivlikdə əhəmiyyətli dəyişiklik olmayacaq
XD BIOCHEM proteinase K stabillik testi: otaq temperaturunda 80 gündən sonra aktivlikdə əhəmiyyətli dəyişiklik olmayacaq.
XD BIOCHEM proteinaz K və rəqib məhsulların nuklein turşusu ekstraksiya effektinin müqayisəsi.Nuklein turşusunun çıxarılması prosesində müvafiq olaraq XD BIOCHEM və rəqabətli proteinaz K istifadə olunur.XD BIOCHEM proteinaz K-nin ekstraksiya effektivliyi daha yüksəkdir və hədəf genin Ct dəyəri daha aşağıdır.
Göndərmə vaxtı: 31 dekabr 2021-ci il