Ətrafımızda adi görünən, amma əslində səssizcə bizə çox töhfə verən bir çox tanınmamış qəhrəman var. Proteinaz K molekulyar diaqnostika sənayesində "tanınmamış qəhrəman"dır, baxmayaraq ki, sənayedəki "böyük və güclü" ilə müqayisədə proteinaz K o qədər təmkinlidir ki, biz onun əhəmiyyətini çoxdan görməzdən gəlmişik. Yeni tac epidemiyasının baş verməsi ilə proteinaz K-ya tələbat kəskin şəkildə artıb və evdə və xaricdə təklif istehlakdan çox geridə qalıb və hamı birdən proteinaz K-nın bu qədər vacib olduğunu anladı.
Proteinaz K-nın istifadəsi nədir?
Proteinaz K, proteolitik ferment aktivliyinə malik serin proteazdır və geniş mühitlərdə (pH (4-12.5), yüksək duzlu bufer, 70°C yüksək temperatur və s.) aktivliyini qoruya bilir. Bundan əlavə, proteinaz K-nin aktivliyi SDS, karbamid, EDTA, quanidin hidroxlorid, quanidin izotiosianat və s. tərəfindən inhibə edilmir və müəyyən miqdarda yuyucu vasitə də proteinaz K-nin aktivliyini artıra bilər. Tibbi müalicədə (virus və mikrob dezinfeksiyası), qidada (ətin yumşaldılması), dəridə (saçların yumşaldılması), şərabçılıqda (spirtlə təmizləmə), amin turşusu hazırlanmasında (lələklərin parçalanması), nuklein turşusunun çıxarılmasında, yerində hibridləşmədə və s. proteinaz K tətbiqləri mövcuddur. Ən çox istifadə edilən tətbiq nuklein turşusunun çıxarılmasıdır.
Proteinaz K, nuklein turşularına sıx bağlı olan histonlar da daxil olmaqla, nümunədəki bütün növ zülalları fermentləşdirə bilər ki, nuklein turşuları nümunədən ayrılıb ekstrakta buraxılsın və bu da ekstraksiya və təmizlənmənin növbəti mərhələsini asanlaşdırsın. Viral nuklein turşusunun aşkarlanmasında proteinaz K virus nümunəsi məhlulundakı vacib komponentlərdən biridir. Proteinaz K, daşınma və aşkarlama mərhələsində daha təhlükəsiz olan virusun örtük zülalını çatlada və təsirsiz hala gətirə bilər; bundan əlavə, proteinaz K həmçinin RNazanı parçalaya bilər, virus RNT-sinin parçalanmasının qarşısını alır və nuklein turşusunun aşkarlanmasını asanlaşdırır.
Proteinaz K-nin gecə şöhrəti
İstər elmi tədqiqat sahəsində, istərsə də IVD sahəsində nuklein turşusunun çıxarılması ən əsas təcrübədir, ona görə də proteinaz K həmişə çox vacib bir varlıq olub. Lakin keçmişdə proteinaz K rolundan daha az tanınırdı. Bunun böyük bir hissəsi proteinaz K-nın tələb və təklif əlaqəsinin çox sabit olması ilə bağlı idi. Az adam proteinaz K-nın tədarükünün problem olacağını düşünərdi.
Yeni tac epidemiyasının baş verməsi ilə nuklein turşusu testlərinə tələbat artmışdır. 2020-ci ilin iyun ayının sonuna qədər Çində təxminən 90 milyon yeni tac testi aparılmışdır və bu rəqəm qlobal miqyasda daha da həyəcanvericidir. Nuklein turşusu ekstraksiyası təcrübələrində proteinaz K-nin işçi konsentrasiyası təxminən 50-200 μq/ml-dir. Ümumiyyətlə, nuklein turşusu nümunəsini çıxarmaq üçün təxminən 100 μq proteinaz K tələb olunur. Faktiki istifadədə, nuklein turşusu ekstraksiyasının səmərəliliyini artırmaq üçün tez-tez Proteinaz K daha çox miqdarda istifadə olunur. Yeni koronavirusun nuklein turşusunun aşkarlanması çox miqdarda proteinaz K tələbatını yaratmışdır. Proteinaz K-nin ilkin tələb və təklif balansı tez bir zamanda pozuldu və proteinaz K bir gecədə vacib bir epidemiya qarşısının alınması materialına çevrildi.
Proteinaz K istehsalında çətinliklər
Epidemiyanın inkişafı ilə proteinaz K-nın vacib dəyəri insanlar tərəfindən qiymətləndirilsə də, proteinaz K-nın həddindən artıq aşağı səviyyəli olması səbəbindən proteinaz K-nın istehsalında az sayda yerli şirkətin iştirak etməsi utandırıcıdır. İnsanlar proteinaz K istehsalını qurmaq istədikdə İstehsal prosesi zamanı proteinaz K-nın olduqca xüsusi bir protein olduğu aşkar edildi. Qısa müddət ərzində proteinaz K-nın istehsal gücünü genişləndirmək olduqca çətindir.
Proteinaz K-nin genişmiqyaslı istehsalı aşağıdakı çətinliklərlə üzləşir
1. Aşağı ifadə
Proteinaz K əksər zülalları qeyri-spesifik şəkildə parçalaya və ifadə sahibi hüceyrə üçün ciddi toksikliyə səbəb ola bilər. Buna görə də, proteinaz K-nın ifadə səviyyəsi ümumiyyətlə çox aşağıdır. Proteinaz K-nı yüksək dərəcədə ifadə edən ifadə sistemlərinin və ştammlarının skrininqi ümumiyyətlə daha uzun bir dövr tələb edir.
2. Piqmentlərin və nuklein turşularının qalıqları
Genişmiqyaslı fermentasiya çox miqdarda piqment və nuklein turşusu qalıqlarını daxil edir. Bu çirkləri sadə təmizləmə prosesi ilə təmizləmək çətindir və mürəkkəb təmizləmə xərcləri artırır və bərpa sürətini azaldır.
3. Qeyri-sabitlik
Proteinaz K kifayət qədər sabit deyil, özünü fermentləşdirə bilir və qoruyucu vasitə olmadan onu 37°C-də uzun müddət sabit saxlamaq çətindir.
4. Çöküntü asanlıqla əmələ gəlir
Proteinaz K-nın dondurulmuş qurudulmuş tozunu hazırlayarkən, dondurulmuş qurudulmuş tozdakı proteinaz K-nın bərk tərkibinin yüksək olmasını təmin etmək üçün yüksək konsentrasiyada dondurulmuş qurudulmuş qoruyucu vasitə əlavə etmək lazımdır, lakin proteinaz K-nın konsentrasiyası 20 mq/ml və daha yuxarı olduqda, bu, asanlıqla baş verir. Aqreqasiya çöküntü əmələ gətirir ki, bu da yüksək bərk tərkibli proteinaz K-nın dondurulmuş qurudulmasına böyük çətinliklər yaradır.
5. Böyük investisiya
Proteinaz K güclü proteaz aktivliyinə malikdir və laboratoriyada digər proteazları hidrolizə edə bilər. Buna görə də, proteinaz K tədqiqat, inkişaf və istehsal üçün ixtisaslaşmış istehsal sahələri, avadanlıq və personal tələb edir.
XD BIOCHEM-in proteinaz K məhlulu
XD BIOCHEM yetkin bir zülal ifadəsi və təmizlənməsi platformasına malikdir və rekombinant zülalların ifadəsi və təmizlənməsi, eləcə də istehsal proseslərinin optimallaşdırılması sahəsində zəngin təcrübəyə malikdir. Tədqiqat və inkişaf qrupunun sürətli formalaşması sayəsində proteinaz K-nin genişmiqyaslı istehsal prosesi aradan qaldırılıb. Dondurulmuş qurudulmuş tozun aylıq məhsuldarlığı 30 kq-dan çoxdur. Məhsul sabit performansa, yüksək fermentə xas aktivliyə və ev sahibi sitoxrom və nuklein turşusu qalıqlarına malik deyil. XD BIOCHEM ilə əlaqə saxlamağa xoş gəlmisiniz. Sınaq paketi əldə edin (E-poçt:sales@xdbiochem.comTel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM-in texniki həllərinə daxildir
Çoxnüsxəli plazmid inteqrasiyasından istifadə edərək, 8 q/L ifadə səviyyəsinə malik yüksək ifadəli ştammlar seçilir ki, bu da proteinaz K-nin aşağı ifadə səviyyəsi problemini aradan qaldırır.
Çoxmərhələli təmizləmə prosesinin qurulması yolu ilə, proteinaz K-nin sitoxrom və nuklein turşusu qalıqları standart dəyərdən aşağı səviyyədə uğurla təmizləndi.
Qoruyucu bufer formulalarının yüksək məhsuldarlıqlı skrininqi vasitəsilə proteinaz K-nı 37°C-də sabit saxlaya bilən bir bufer seçildi.
Skrininq buferləri proteinaz K-nın yüksək konsentrasiyalarda asanlıqla aqreqasiya olunması və çökməsi problemini aradan qaldırır və proteinaz K-nın yüksək bərk tərkibli dondurma-qurutmasının əsasını qoyur.
XD BIOCHEM proteinaz K nümunəsi
XD BIOCHEM proteinaz K stabillik testi: otaq temperaturunda 80 gündən sonra aktivlikdə əhəmiyyətli bir dəyişiklik olmayacaq
XD BIOCHEM proteinaz K stabillik testi: otaq temperaturunda 80 gündən sonra aktivlikdə əhəmiyyətli bir dəyişiklik olmayacaq.
XD BIOCHEM proteinaz K və rəqib məhsulların nuklein turşusu ekstraksiyasının təsirinin müqayisəsi. Nuklein turşusu ekstraksiyası prosesində müvafiq olaraq XD BIOCHEM və rəqabətli proteinaz K istifadə olunur. XD BIOCHEM proteinaz K-nın ekstraksiya səmərəliliyi daha yüksək, hədəf genin Ct dəyəri isə daha aşağıdır.
Yayımlanma vaxtı: 31 Dekabr 2021